该研究首先对EVs内各类核酸分子的分布特征进行了系统性探究。结果发现，EVs内部的mRNA是理想的检测标志物，而外部的DNA则不适合。这是因为研究通过一系列实验证实，mRNA主要存在于EVs内部，受到完整膜结构的保护，能避免被RNase降解；而DNA则主要位于EVs外部，易受环境中游离DNA的影响。以常见的β-肌动蛋白和在胰腺癌中常发生突变的KRAS基因为例，β-肌动蛋白在EVs内部的mRNA水平显著高于外部的DNA水平，这为后续的检测提供了可靠的分子靶点。

基于这一发现，研究团队整合上游免疫磁珠捕获技术，建立了免疫磁珠EVs的mRNA定量聚合酶链反应（iMEMQ）方法，实现了EVs富集与分析的一体化流程。

在检测灵敏度方面，iMEMQ表现出显著优势。与酶联免疫吸附试验（ELISA）相比，其对CD9的检测灵敏度高出260.0倍，对EVs中EphA2的检测灵敏度更是达到775.6倍；与免疫PCR相比，对CD9的检测灵敏度也高出53.9倍。

具体来看，对于PANC-1细胞来源的EVs整体群体，mRNA-qPCR的定量限低至2.05×10⁵个颗粒/mL，而ELISA和免疫PCR的定量限分别为2.00×10⁷个颗粒/mL和3.40×10⁶个颗粒/mL，mRNA-qPCR的灵敏度约为ELISA的98倍、免疫PCR的16.7倍。

针对不同的EV亚群，如CD9⁺、CD63⁺、CD81⁺EVs，mRNA-qPCR同样展现出更高的灵敏度，分别是相应ELISA检测的23.4倍、19.2倍、66.1倍，是相应免疫PCR检测的9.1倍、7.6倍、13.0倍。对于来自正常胰腺导管上皮细胞HPNE的EVs整体群体，mRNA-qPCR的灵敏度优势更为明显，达到CD9-ELISA的622.6倍。

在特定目标蛋白阳性EVs（POI⁺EVs）的分析中，iMEMQ的优势进一步凸显。以胰腺癌相关的EphA2⁺EVs为例，采用iMEMQ方法（即特异性捕获EphA2⁺EVs结合mRNA-qPCR检测），与其他策略相比，灵敏度最高可提升775.6倍。这对于检测那些在正常细胞分泌的EVs背景中占比极低的疾病相关EVs来说，意义重大，能更精准地捕捉到疾病信号。

同时，iMEMQ在血浆样本中的应用也得到了验证。其具有出色的特异性，抗体对EVs的捕获能被相应蛋白完全阻断，不受其他蛋白干扰。在健康供体的EDTA血浆中，CD9⁺和CD63⁺EVs占比较高，分别约为69%和63%，而CD81⁺EVs占比仅约14%。并且，iMEMQ对EVs的富集效率极高，超过98%。

通过分析还发现，血浆中高比例的EVs同时表达CD9和CD63，CD9和CD81的重叠较少，CD63和CD81则有相对较高的共定位。在疾病相关EVs的检测中，iMEMQ也表现出良好的可行性。在B16-F10黑色素瘤荷瘤小鼠模型中，能检测到PD-L1⁺EVs的水平显著高于对照组；在BxPC-3胰腺癌荷瘤小鼠模型中，EphA2⁺EVs和TROP2⁺EVs的水平也显著高于非荷瘤小鼠，充分证明了其在疾病相关EVs分析中的应用潜力。

总的来说，这项研究通过明确EVs内核酸分子的分布特征，建立了iMEMQ这一高灵敏度、高特异性且操作简便的EVs富集与分析方法。它不仅为EVs的基础研究提供了有力工具，更在疾病诊断领域展现出广阔前景。随着这一技术的不断完善和应用，未来我们或许能通过对EVs的精准检测，更早地发现疾病踪迹，为疾病的诊断和治疗带来新的突破，让我们在对抗疾病的道路上更具主动权。

参考文献：

Li C, He S, Ding Y, et al. iMEMQ: Sensitive and Versatile Detection for Extracellular Vesicles via Immunomagnetic EVs' mRNA qPCR. Anal Chem. Published online July 17, 2025. doi:10.1021/acs.analchem.5c01470