推医汇

首页 > 行业动态

肿瘤NGS常见样本类型和采集要求

2023-12-26 21:21:19来源:基因谷
1、肿瘤NGS常见的样本类型

1.1 按照部位分类

分为组织样本、血液样本和恶性渗出液样本。

①组织样本

组织样本包括FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)样本和新鲜组织。FFPE样本包括蜡块和石蜡切片(白片和卷片)。

组织样本的取样方式有穿刺和手术。

②血液样本

血液样本检测包括WBC(白细胞)检测和血浆中cfDNA检测。

 

③恶性渗出液样本

恶性渗出液的取样部位包括胸、腹水(上清和沉淀包埋)、心包积液和脑脊液。

 

1.2 按照DNA样本类型分类

分为gDNA、cfDNA和Total RNA

 

gDNA

Genomic DNA(基因组DNA),指有机体在单倍体状态下的DNA全部含量,通过组织提取、全血、WBC提取、胸腹水沉渣包埋可以获得。

 

②cfDNA

Circulating free DNA(血浆游离DNA),血浆(外周血)中游离存在的不包含在完整细胞结构内的DNA,从血浆提取,恶性渗出液上清提取得到。

循环肿瘤DNA(ct DNA:来自于坏死或凋亡的肿瘤细胞,或来自于肿瘤细胞分泌的外泌体,是人体血液循环系统中不断流动的,携带一定特征(突变,插入,缺失,拷贝数异常、甲基化等)的来自肿瘤基因组的DNA片段。在血液中的含量极低,约占整个cfDNA的0.01%-1%。

 

③Total RNA

总RNA,包含了细胞中的全部RNA(mRNA、rRNA、tRNA等),从组织提取、胸腹水沉渣包埋中获取。

 

2、肿瘤NGS常见样本的采集要求

 

2.1 组织样本(FFPE)样本采集要求

白片/卷片厚度4-5μm, 手术组织15片,穿刺活检组织25片(片数不绝对,可根据组织大小适当增减)。烤片时间控制在10-15分钟。

手术有多个蜡块保存时,应选择肿瘤细胞含量高的蜡块/切片送检,送检蜡块最好为1年以内制作保存。

2.2 全血样本(WBC提取)要求

为防止对下游提取过程产生影响,血液采集管应尽量使用EDTA抗凝管或柠檬酸钠抗凝管,肝素抗凝管会对下游实验的酶产生抑制。

保存时间:2-8℃保存一周,-20℃保存一个月,-70℃长期保存。-20℃保存样本,抽提前应37℃水浴溶解(防止纤维蛋白生成影响提取),样本抽提前需充分混匀。

 

2.3 血浆样本(提取cf DNA)要求

采血应为术前,术后患者ctDNA含量会迅速下降。化疗初用药时也会影响ctDNA含量。

EDTA抗凝管采集:离体后两小时内进行分离,最长不超过4h。cf DNA采血管:常温下7天内进行血浆分离。

采样量尽量8-10mL,2管,勿剧烈震动,避免溶血。样本与溶血比色卡比对,溶血程度需≤4。